（8）DNAシークエンス法

はじめに

　DNAあるいはRNA（逆転写酵素によりcDNAに転換後に実施）の塩基配列を決定するということは，遺伝子の相違を最終的に判定するためのゴールデンスタンダードである．DNAの塩基配列決定法には，大きく分けて次の2通りの方法がある．第一は1977年に発表されたマクサム-ギルバート（Maxam-Gilbert）法^1）であり，ジメチル硫酸やヒドラジンなどの化学試薬で塩基特異的な修飾と分解を行うことにより，DNAを切断・断片化し，標識された³²Pをオートラジオグラフィーで検出するものであった．詳細は他の総説，^2）を参考にしていただきたい．もう1つは同年に発表されたサンガー（Sanger）法あるいはジデオキシ（dideoxy）法^3）である．本法は3’の位置のアルコール基を水素に置換した4種類のジデオキシヌクレオチド（ddNTP，図1）を，DNAポリメラーゼの基質特異的競合阻害剤として基質であるデオキシヌクレオチド（dNTP）と同時に加えて反応させる方法である．この反応ではddNTPを結合したDNAがその時点で伸長反応を停止してしまうことを利用した方法である．この方法は各メーカーから種々のキットが販売され，さらに改良が加えられたことから，どこの施設でも比較的容易にシークエンスが可能となり普及した．

　このジデオキシ法はさらに次の2とおりの方法に分類される．