定量的RT-PCR法

はじめに

　1985年に発表されたPCR法^1）（遺伝子増幅法）は，特定の塩基配列に挟まれたDNA領域を，試験管内で増幅する大変ユニークな方法であり，特に1988年に耐熱性のTaq DNAポリメラーゼ^2）が導入されてからは，遺伝子研究に欠かせない技術となっている．このPCR法の改良法の1つであるRT-PCR法^3）は，特定の塩基配列を有するRNAをcDNA断片の形で増幅する方法である．両者は，技術的には非常によく似ているけれども，目的の点で決定的に異なる．PCR法は，遺伝病の原因遺伝子の検出や同定などを目的としてゲノムDNAの塩基配列を解析する際に利用されることが多い．これに対しRT-PCR法は，細胞の分化（differentiation）や不死化（immortalization）の分析を目的として，発現遺伝子のmRNAの種類や量を検出する際に利用されることが多い．したがって，PCR法ではあまり重視されなかった定量性がRT-PCR法には求められることになる（PCR法の原理については，「遺伝子操作技術マニュアル」［日本臨床化学会関東支部監修，医学書院］などを参照されたい）．