in situ RT-PCR法

はじめに

　細胞や組織におけるメッセンジャーRNA（mRNA）の発現を見る方法としてノーザンブロット（Northernblot）法がある．この方法で検出できないような微量なmRNAに対しては逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（reversed transcription-polymerase chain reaction；RT-PCR）法が用いられる．これは，まず逆転写酵素によりmRNAから相補的DNA（cDNA）を合成し，これを鋳型として耐熱性DNAポリメラーゼを用いたPCRを行い，標的分子を増幅することにより検出する方法である．これらの方法は感染症，腫瘍，遺伝性疾患などの検査に導入され，検査室レベルですでに実用化されつつある．

　しかし，これらの方法では組織をすりつぶして核酸の抽出が行われるため，いろいろな成分が混じりあっている細胞や組織検体では，実際にどの細胞が目的のmRNAを発現しているのかを知ることはできない．そこで，細胞・組織の形態を保存したまま，切片上でmRNAの発現の局在を検出するin situハイブリダイゼーション（in situ hybridization；ISH）法が考案された．これは，切片上で核酸プローブを標的分子とハイブリダイゼーションさせることにより，目的のmRNAを検出する方法である^1）．