悪性グリオーマに対するインターフェロン遺伝子療法の開発

Basic Research for Interferon Gene Therapy against Malignant Glioma

I．はじめに

　ヒトβ型インターフェロン（HulFN—β）は分子量20,000,166個のアミノ酸よりなるタンパク質^14）で，抗ウイルス作用のほか，抗腫瘍作用^3），免疫賦活作用^3,12）を始めとする多面的生理活性を示すことが報告されており，主として線維芽細胞より産生されるサイトカインである．このHulFN—βはヒトグリオーマ細胞に対し，100-1000IU／ml濃度でcytostaticあるいはcytocidalに働くことが確認されており^19），臨床的にも悪性グリオーマ患者に対し抗腫瘍剤として用いられている．通常100−300×104IUのHuIFN—βを連日点滴静注する方法が行われており，その有効性が確認されている．しかしながら，その有効率は10-30％と必ずしも満足できるものではない^17,18）一方HuIFN—βはヒトグリオーマ細胞内で産生され，自らの増殖を抑制している司1能性が示唆されている^8）．そこでわれわれはHuIFN-β遺伝子を特殊な脂質組成を持つリボソームに包埋し，ヒトグリオーマ細胞に遺伝了．導人し内因性HuIFN-βをヒトグリオーマ細胞自身より大量に産生させ死滅させるというインターフェロン遺伝子療法の基礎的研究を行い，その結果をすでに報告している^11）．そこで今回はさらに効率よく遺伝子導入を行うために，遺伝子導人の際の担体となるリポソームの脂質組成を変化させ，ヒトグリオーマ細胞に好する遺伝子導人効率やリボソームの細胞障害性の違いについて検討した．

Abstract

In order to establish new interferon therapy against malignant glioma by selective transfection of its gene, we developed a novel transfection system using lipo-somes bearing positive charges on their surface and en-trapping plasmids containing the HuIFN- β gene (pSV2IFN- (3) . The liposomes were composed of N-(α -trimethylammonioacetyl) -didodecyl-D-glutamate chloride (TMAG) , dilauroylphosphatidylcholine (DLPC) , and dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE) as a molar ratio of 1: 2: 3. The liposomes were not observed to have cytotoxicity for human glioma cells, when applied at a rate less than 15nmol/ ml. This liposome-mediated transfection of the gene into the cultured glioma cells (U-251-MG) resulted in the secretion of HuIFN- β into the medium. The HuIFN- β level in the culture media of glioma cells reached 23 IU/ml after 96h of incubation. When the pSV2IFN- β containing liposomes were coupled with a monoclonal antibody (G-22 MCA) against glioma-associated antigen (G-22), the level of HuIFN- β in the medium was 181 IU/ml, resulting in a 7-fold increase. It was indicated that this transfection system was a safe and selective method in the case of TMAG/ DLPC/DOPE liposomes.