培養細胞とクロマトグラフィー分画におけるCreutzfeldt-Jakob病の感染因子

Creutzfeldt-Jakob disease agent in tissue culture cells and chromatographic fractions.

はじめに

　動物にtransmissibleであるCreutzfeldt-Jakob病（CJD），Gerstmann-Sträussler症候群，Kuruとscrapieは，同一疾患群で，病変の主座は中枢神経の神経細胞にある。これらのtransmissible agentは中枢神経以外の病変の認められない諸臓器中にも認められる^7）。一般に，成熟動物脳の細胞培養では神経細胞は初代培養時にのみ認められ，継代することにより神経細胞は脱落し，星膠細胞，線維芽細胞，血管内皮細胞が継代培養される。Yanagiharaらによれば，CJDやscrapie agentは通常の培養法では継代とともに消失し，SV40 transformed cellのみがagentを保持し続けた^9）。彼らはtransmissible agentを保持する培養細胞の同定を行なっておらず，星膠細胞がagentのcarrierとなりうるかどうか明らかでない。筆者らは，CJD発症ラット脳組織の培養を行ない，星膠細胞の分化抗原であるS100蛋白，グリア線維性蛋白（GFAP）の有無，継代培養細胞および培養液中のCJD agentの有無について検索した。

　transmissible agentの本体が核酸を有しない蛋白のみからなるのか，あるいはきわめて小さな核酸を含む複合体なのか，未だ解明されていない^6）。しかし，少なくともある種の蛋白がtransmissible agentに関連していることは明らかであり，scrapie agentはアミロイド類似糖蛋白といわれている^3）。scrapie agentは，蛋白分解酵素とdetargentで抽出され，遠心分離法で精製され^5），その分子量は27000〜30000である^3）。脳蛋白の分離精製には，塩析とクロマトグラフィー法が簡便である。筆者らは，硫酸アンモニウムによる塩析分画と，クロマトグラフィーを行ない，CJD agentの分布について検討した。

　We studied on Creutzfeldt-Jakob disease (CJD) agent in tissue culture cells derived from CJD infected rat brain, in ammonium sulfate fractions, and in chromatograhic fractions. The assay of CJD agent was based on incubation period of intracerebrally inoculated mice. In tissue culture, the cells were fibroblastic and did not express S 100 and glial fibrillary acidic protein. The activity of CJD agent was higher in the cells than in the medium. CJD agent was mostly precipitated with 60% ammonium sulfate solution, although it was still present in 100% ammonium sulfate solution. Sepharose CL-6B gel chromatography revealed that CJD agent was highest in the void and 36000 molecular weight fractions, and were higher in 24000 to 27000 M. W. fraction than in 30000 to 32000 M. W. fraction. CJD agent adsorbed to DEAE cellulose was not eluted with O.1M NaC1, Tris buffer but was fully eluted with 0.3 M NaCl solution. CJD agent should be closely associated with an acidic protein of 36000 molecular weight.