site-directed mutagenesis

はじめに

　クローニングした遺伝子の構造と機能の関係を明らかにしたり，既に遺伝子の構造が知られている蛋白質の構造と機能の関係を明らかにするために，DNAの構造を人工的に変えた変異型DNAを作製し，そのDNA自体の機能およびそのDNA情報から遺伝子工学によって作製した蛋白質の機能を解析する方法として，site-directed mutagenesis （指定変異導入法）^1,2）が有用である．これは，合成ヌクレオチドを用いてヌクレオチド単位の置換，欠失，挿入などを自由に行うことができる方法である．また，同様の目的に亜硝酸を用いたsegment-directed mutagenesis^3）やカセット変異法^4）などが用いられる．site-directed muta-genesisにおいては現在各社からgapped duplex法^5,6）あるいはuracil DNA法^7,8）を原理とした種々のキットが発売されている．これらの方法に関する解説は他の総説^9）および各社の説明書を参考にしていただきたい．本総説では，われわれが使用しているDeng andNickoloffの方法^10）によるsite-directed mutagenesisについて解説したい．なお，この方法を利用したキットはCLONTECH社からTransformer^TM　Site-Di-rected Mutagenesis Kitとして発売されている．