免疫組織化学における分子遺伝学の役割―電顕レベルのin situ hybridization

　電顕レベルのin situ hybridization（EMISH）は個々の細胞内でのDNA,mRNAの局在を明らかにするためには必須であり，本法には，①preem-bedding法，②postembedding法，③超薄凍結切片を用いる方法，の3つがある．③は形態の保持の点に問題があり，①と②が望ましい．その手法についてラット下垂体細胞におけるGH mRNAのEM-ISHを例に概説する．

　（1） preembedding法：4％paraformaldehydeで固定後の6μmの凍結切片を作製し，ビオチン化oligomlcleotide probeを用い，hybridizationを37QCで1晩行う．hybridization signalはstrept-avidin-biotin-horseradish peroxidase （HRP），diaminobendizine（DAB），H₂O₂で検出し，osmifi-cation後，Quetol－812に包埋し，電顕下に観察する．図1（左）のとおり粗面小胞体上polysomeにosmium blackとしてmRNAが認められる（bar＝0.2μm）．