顕微蛍光測光装置による単一細胞内pH測定の検討

　従来細胞内pHの測定は，pH電極，弱酸性，弱塩基色素などを用いていたが，現在は超高感度pH指示薬BCECF-AMが使われるようになった．BCECF―AMは細胞内pH測定のための蛍光試薬としてRinkらによって開発されたfluorescin誘導体である．BCECF-AMは細胞膜を透過した後，細胞内でエステラーゼにより水解され，膜不透過性のBCECFになる．BCECFは励起光450～530nmに対し約504nmにピークをもつ蛍光を発する．現在，細胞内pHは励起光496／450nmの蛍光強度比とpHの関係を示すキャリブレーションカーブ（標準曲線）を用いて算出されている．この方法を基礎にして単一細胞内pHの測定を試みた．図1はThomasらのナジェリシン／K法による標準曲線を示す．