顕微蛍光測光装置による単一細胞ライソゾーム内pH測定の検討

　従来からライソゾーム内pHが酸性であることは，ほとんどのライソゾーム酵素の至適pHが酸性にあることから推察されてきた．以前には，ライソゾームにpH指示薬を取り込ませてその色調をもって確認されてきたが，この方法ではライソゾームへの蓄積度が低く，色調の変化が見にくいためライソゾーム内pHは3〜6といった幅広い報告がされていた．そこで感度良く，かつ正確に生細胞中でライソゾーム内のpHを測定する方法を開発する必要がある．多数の蛍光色素の中で，FITC（フルオレッセイン）はpHに依存して蛍光スペクトルの変化する数少ない物質の1つであり，しかもその範囲がpH 4〜8なのでライソゾーム内pHの測定には最適である．pH変化に伴って蛍光強度が変化するFITC溶液は450nmと495nmの蛍光強度の比により，pHの標準曲線が得られることは以前から知られており，この理論を基礎にして検討した．