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神経および筋組織を,それぞれin vitroで発育分化させることができるようになつてから,この両者を有機的に結合し神経・筋結合(以下N-M-Jと略す)を形成せしめようとする試みは,ごく最近まで成功しなかつた。これには種々の理由があるであろうが,手技上の困難さもさることながら,たとえN-M-Jがin vitroで形成し得たにしても,それを形態学的に証明することと,神経細胞・神経線維・筋とつながる機能的問題をいかに形態と関連せしめうるかという将来への方法論的展望に困難さがあつたからであろう。
1956年Crain3)は微少電極を鶏胚後根神経節培養組織に挿入し,神経細胞,神経線維の生物電気的研究を行ない,この方法による培養組織での電気生理学的研究の可能性も出て来た。また神経組織の培養も鶏胚後根神経節から哺乳動物後根神経節,小脳,脊髄,大脳皮質へと次第に拡げられ,これらの培養組織での電気生理学的研究も進められ,実験的アレルギー性脳脊髄炎血清によるシナプスへの影響など研究されるに至つた5)。
Formation of neuromuscular junction in vitro has been successfully achieved in cultures of spinal cord, and trypsinized and non-trypsinized skeletal muscles from rats and mice. This was confirmed by electrophysiologic study, vital staining with methylene blue, histochemical localization of Acetylcholinesterase (AchE) and silver impregnation of axons. Fetal rat spinal cord, 11-13 days in utero, and muscle fibers, 13-18 days in utero, seemed optimal for in vitro development of N-M-J.
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