ブロッキングに問題がある

内因性ペルオキシダーゼによる影響

■原理・原因

　好中球，好酸球などは内因性ペルオキシダーゼ活性，また赤血球ヘモグロビンは偽ペルオキシダーゼをもつため，HRP（horseradish peroxidase）系発色剤が反応し，発色してしまう（図1）．図2は血管内に存在する血球がもつ内因性ペルオキシダーゼや偽ペルオキシダーゼにDAB（3，3’-diaminobenzidine）反応し，茶褐色に色づいている．

　ホルマリン固定パラフィン包埋切片では，ブロック作製までに熱やさまざまな薬品により，内因性のペルオキシダーゼ活性は減弱しているが，凍結切片や細胞診検体は生体内の状態に近いため，ホルマリン固定パラフィン包埋切片に比べて内因性ペルオキシダーゼ活性が非常に強い状態にある．そのため，凍結切片や細胞診検体を用いる場合，内因性ペルオキシダーゼのブロッキングは，時間をかけてしっかり行う必要がある．