螢光抗体法における観察法とその進歩

螢光顕微鏡の原理とその開発の歩み

　螢光抗体法は原則として特異的抗原・抗体結合物中の抗体に標識された螢光色素を励起してやり，その発光（螢光）を観察する方法である以上，特殊の顕微鏡（螢光顕微鏡）―高エネルギーの発生装置，励起光の選択フィルターと，螢光は通すが散乱または反射励起光はカットするフィルターシステム，特に本法の観察に有利に設計された顕微鏡（暗視野コンデンサー，対物レンズ，ステージなど）―を必要とする．そして，その結果，①視野が明るく，広く，②コントラストが明瞭で解像力にすぐれ，③操作法が簡単なうえ，種々のフィルター系を組み合わせ用いられることが要求される．

　螢光染色標本の観察とは異なり，螢光抗体法では時としてきわめて微量の螢光色素の発光をもトレースする必要があり，したがって，用いる螢光色素の特性にのっとり，すべて上記の条件を満たす装置の開発に中心がおかれた．螢光抗体法の生いたちからすでに40有余年経過した今日，おのずから用いられる螢光色素も選別され，現在ではその95％が青緑色の螢光を出すfluorescein isothiocyanate（FITC）で，残りの5％が赤橙色の螢光を用すtetramethylrhodamine isothiocyanate（TRITC）とtetraethylrhodamine（rhodamine B 200 RB 200）にしぼられている．