リポソームと蛍光指示薬HPTSを用いたリソソーム内pH測定の検討

　従来からリソソーム内pHが酸性であることは，ほとんどのリソソーム酵素の至適pHが酸性にあることから推察されてきた．これは，以前には，リソソームにpH指示薬を取り込ませてその色調で確認されてきた．しかし，この方法ではリソソームへの蓄積度が低く，色調の変化が見にくいために，リソソーム内pHは3～6といった幅広い報告がされていた．

　そこで感度が良く，かつ正確に生細胞のリソソーム内pHを測定する方法を開発する必要がある．今回，多数のpH蛍光色素の中からHPTS （8-hydroxy-1, 3，　6-pyrenetrisulfonate）を用いたのは，pHに依存して蛍光スペクトルが変化する数少ない物質の1つであり，しかもその範囲がpH4～8なのでリソソーム内pHの測定には最適であるからである^1）．pH変化に伴って蛍光強度が変化するHPTS溶液は，380 nmと450nmの蛍光強度の比により，pHの標準曲線が得られることは以前から知られている^2）．この理論を基礎にして検討した．