脳腫瘍における腫瘍浸潤リンパ球の分離と細胞障害活性の検討

SEPARATION AND FUNCTIONAL ANALYSIS OF TUMOR-INFILTRATING LYMPHOCYTES IN BRAIN TUMOR TISSUES

　抄録　脳腫瘍における腫瘍浸潤リンパ球の機能を調べる目的で，グリオーマ12例，転移性脳腫瘍6例の腫瘍組織より，不連続密度勾配法により腫瘍浸潤リンパ球を分離した。分離リンパ球と腫瘍浸潤リンパ球とをモノクローナル抗体を用いて免疫組織化学的方法により比較した。また分離リンパ球の自己腫瘍細胞に対する細胞障害活性を⁵¹Cr release assayにより検討した。分離リンパ球を染色すると，表面抗原の染色性は温存されていた。分離リンパ球のphenotypeは，腫瘍浸潤リンパ球同様，Tリンパ球が主体であり，Bリンパ球はほとんど認めなかった。また同一症例でのLeu−3a／2a比も，両者間でほぼ一致したことから，分離操作による特定のphenotypeの欠損はなく，分離リンパ球に腫瘍浸潤リンパ球の機能を反映しうることが示唆された。分離リンパ球数は，グリオーマ群で1.2×10⁵-2.1×10⁵／g，転移性脳腫瘍群で1.1×10⁵-3.8×10⁵／gであった。またviabilityは90％以上であった。自己腫瘍細胞に対する細胞障害活性は，グリオーマ群で42％，転移性脳腫瘍群で33％の症例に認められた。細胞障害活性と分離リンパ球数および腫瘍細胞におけるHLA-DR抗原発現との相関は認めなかった。

Separation of tumor-infiltrating lymphocytes (TIL) from surgical specimen of fourteen gliomas and 6 metastatic brain tumor tissues was achieved by discontinuous density gradients. Comparison of phenotypes between separated lymphocytes and TIL in situ was examined by immunohistochemical method using monoclonal antibodies. The cytotoxic activity of these separated lymphocytes was also examined in short-term ⁵¹Cr release assay against fresh autologous tumor cells. Immunohistochemical staining of separated lymphocytes revealed the preservation of cell surface antigens of the lym-phocytes. Most of separated lymphocytes were T lymphocytes and both phenotypes cytotoxic/sup-pressor and helper/inducer T lymphocytes were found. The Leu-3a/2a ratio of separated lym-phocytes were compared with TIL in situ in the same patients and these values were almost equal in both lymphocytes. Cell number of separated lymphocytes were 1.2×10⁵-2.1×10⁵/g in glioma and 1.1×10⁵-3.8×10⁵/g in metastatic patients. Cytotoxicity against autologous tumor cells was detected in 5 out of 12 glioma and 2 out of 6 me-tastatic patients. There was no correlation between the cytotoxicity and cell number of separated lymphocytes or HLA-DR antigen expression on tumor cells.