蛍光標識法によるライソゾーム蛋白分解活性の解析

Analysis of lysosomal degradation of proteins in vitro by fluorescein isothiocyanate labeling

　ライソゾームはほとんどすべての生きた細胞内に存在する。種々の細胞構築物質はオートファジーやヘテロファジーのメカニズムによって，最終的には，ライソゾームに供給され分解されている。ライソゾームには多種類のプロテアーゼが存在し，蛋白質はこれらのプロテアーゼの共同作用によって，アミノ酸にまで分解されると考えられる。したがって，蛋白質分解測定法のうち，蛋白質の分解によって生ずるアミノ酸の量を測定する方法は，ライソゾーム全体の蛋白質分解能を理解するためには重要である。そのための方法として，蛍光標識法による蛋白質分解測定法について述べる。

　この方法は，蛍光標識剤Fluorescein isothiocyanate（FITC）がセファデックスやトヨパールのゲルに強い親和性をもっていることを利用している。FITCで標識したアミノ酸はこれらのゲルに親和性をもっているので，これらのゲルのカラムから遅れて溶出するのに対し，FITC標識蛋白質はゲルに親和性を持たず，カラムから早く溶出するので，前者を後者から簡単に分離できる。このようなFITCのゲルに対する親和性を利用して，アイソトープを使うことなく，種々の蛋白質のライソゾーム酵素による分解を測定する方法について述べる。