酵素標識法

Enzyme labelling methods

　抗体にペルオキシダーゼを標識する操作であるが，初期にはペルオキシダーゼと抗体分子中のアミノ基をFNPS（p,p′-difluoro-m，m′-dinitro diphenyl sulfone）やグルタールアルデヒドなどのbifunctional reagentを用いて結合する方法がとられた。しかし，ペルオキシダーゼ中のfreeなアミノ基が少ないため効率よい標識ができなかった。そこで考案されたのがNakane and Kawaoiによる，ペルオキシダーゼ中の糖を利用し，アルデヒド化させ，それを抗体分子中のアミノ基に結合させる方法である（図1）。これにより効率の良い標識抗体が作製されるようになった。現在までに本法にいくつかの改良が加えられている。本免疫実験マニュアルでは当教室で現在施行しているWilson and Nakane^1）による改良方法の手順を記載する。