改良PTH-RP免疫放射定量法：高カルシウム血症の鑑別診断への臨床応用

Modified Immunoradiometric Assay of Parathyroid Hormone-Related Protein: Clinical Application in the Differential Diagnosis of Hypercalcemia

　われわれは吸着精製したポリクローナル免疫抗体を用いて，高感度かつ特異的な副甲状腺ホルモン関連蛋白（PTH-RP）の固相免疫放射定量法（IRMA）を開発した．PTH-RP（37-74）を認識する抗体をポリスチレンビーズに固相化し，それにより検体から分析するものを吸着した；PTH-RPの1〜36番までの間のアミノ酸のエピトープを認識する抗体を¹²⁵Iで標識した．このIRMAはPTH-RP（1-74）とPTH-RP（1-86）を同等に認識するが，PTH-RPのN-端ないしC-端の断片，完全なヒト副甲状腺ホルモン（PTH），あるいはPTHの断片は認識しない．3〜5℃または室温では血漿中のPTH-RPは不安定であるが，アプロチニン（500カリクレイン単位/l）とロイペプチン（2.5mg/l）を加えることにより血液サンプル中のPTH-RPの安定性を増すことができる．これらのプロテアーゼを加えたうえで正常ボランティアおよびさまざまなカルシウム代謝異常患者の血漿サンプルを測定した結果，高カルシウム血症を伴った非血液悪性腫瘍患者の91％（46名中42名）の血中PTH-RP濃度が正常を上回った（＞1.5pmol/l）．ほかの高カルシウム状態を伴った疾患（例えば原発性副甲状腺機能亢進症，サルコイドーシス，そしてビタミンD過剰症）の患者から採取した検体では，PTH-RP濃度は測定不能であった．

We have developed a sensitive, specific solid-phase immunoradiometric assay (IRMA) of parathyroid hormone-related protein (PTH-RP) with use of affinity-purified polyclonal immunoglobulins. Antibodies recognizing PTH-RP (37-74) are immobilized to a polystyrene bead to “capture” analytes from the sample ; antibodies to epitopes within the 1-36 amino acid region of PTH-RP are labeled with 1251. This IRMA recognized PTH-RP (1-74) and PTH-RP (1-86) equivalently, but does not detect N-terminal or C-terminal fragments of PTH-RP, intact human parathyrin (PTH), or fragments of PTH. PTH-RP is not stable in plasma at 3-5℃ or room temperature, buta mixture of aprotinin (500 kallikrein units/L) and leupeptin (2.5 mg/L) improves PTH-RP stability in blood samples. In plasma collectedin the presence of these protease inhibitors from normal volunteersand patients with various disorders of calcium metabolism, PTH-RPconcentrations were above normal (>1.5 pmol/L) in 91% (42 of 46)of patients with hypercalcemia associated with nonhematologicalmalignancy. In plasma from patients with other hypercalcemic conditions (e. g., primary hyperparathyroidism, sarcoidosis, and vitamin Dexcess), PTH-RP was undetectable.