5アポ蛋白—7．モノクローナル抗体による分析法

モノクローナル抗体の原理（図1）

　モノクローナル抗体は，抗体を分泌しない骨髄腫（ミエローマ）細胞ラインと，特異抗原にて免疫したリンパ球を細胞融合させ，その中から単一のクローンを選択して増殖させて作製する．通常，BALB／Cマウス由来のミエローマ細胞ライン（NS−1）と，2〜3回特異抗原で免疫したBALB／Cマウスの脾細胞をポリエチレングリコールで融合させ，限界希釈法を2回行ったものを用いる．NS−1は，HG-PRT欠損株で，通常のBALB／C細胞には毒性を有する8アザグアニン（8AZ）耐性株である．HG-PRT欠損株はアミノプテリン感受性のため，アミノプテリンを含むHAT培地ではNS−1と脾細胞が融合し，HG-PRT陽性となった細胞のみが生き残る．1回の細胞融合で数百個のハイブリドーマが得られるが，この中から，普通は抗原をコートしたプレートを用いるEIA法にて特異抗体を選択し，それを産生するクローンを増やす．抗体の特異性はEIA法，蛍光抗体法，transblotting法により決定される．

　以下にアポ蛋白に対するモノクローナル抗体作製の具体的手順を述べる．