リアルタイムPCR・デジタルPCRの臨床診断への応用

Clinical application of real-time PCR and digital PCR

Point

●リアルタイムPCRではPCR反応の指数関数的増殖領域に設定した閾値からCt値を求める．ケミストリとしてインターカレーター法とプローブ法があり，定量法には相対定量と絶対定量の2つがある．

●リアルタイムPCRの相対定量法は，リファレンス遺伝子との量比を計算した後に，比較したサンプル間あるいはコントロールとの差を調べる．絶対定量法は既知の濃度で作成した検量線から濃度を求める．

●デジタルPCRは標準サンプルの核酸による検量線は必要なく，サンプル中の核酸の初期量を絶対定量する方法である．ドロップレット方式と，ウエルチップ（チャンバー）方式の2つの方法がある．

●リアルタイムPCRに比べてデジタルPCRの検出感度は100〜1,000倍高い．研究あるいは診断の各用途によって適切に使い分けることが重要である．