グラム染色

　グラム染色は1884年にデンマークの内科医Hans Cristian Joachim Gramによって考案された細菌の染色法である．原法は前染色にゲンチアナ紫を用い，その後ヨード液を作用させ，これをエタノールで脱色し，その後サフラニンを用いて後染色する二重染色法である．グラム陽性菌と陰性菌では細菌壁の構造に違いがあり，グラム陽性菌ではゲンチアナ紫とヨードの結合物が，アルコールに脱色されずに細胞壁に残るために青～紫色に染色される．これに対してグラム陰性菌はアルコールに脱色され，後染色のサフラニンによって菌体は赤色に染まる．ゲンチアナ紫は染色液の結晶が析出しやすいため，現在は前染色にクリスタル紫を用いるハッカー(Huker)の変法¹⁾やB ＆ M (Bartholomew ＆ Mittwer)法が広く用いられている．

グラム染色の手技

　表1に主なグラム染色法を示したが，以下にグラム染色の手技の手順を示す．①最初に喀痰などの検体をスライドグラスに薄く塗布し，これをメタノールまたは火炎で固定する．②固定した試料にクリスタル紫液をかけて約1分間染色し，その後流水で洗い流す．③次にヨード液を試料にかけて約1分間染色し，その後流水で洗い流す．④試料にエタノールをかけて約30秒作用させて脱色させた後に流水で洗い流す．⑤さらにサフラニンまたはフクシン液を試料にかけて，約1分間後染色した後に流水で洗い流す．⑥スライドグラスを十分乾燥させた後に検鏡する．