グリオーマにおけるp53蛋白過剰発現について—ELISAによる検討

Overexpression of p53 Protein in Gliomas

I．はじめに

　悪性グリオーマの染色体レベルにおける異常として9番，10番，17番，22番などの欠損が知られており^3,13,14），特に17番短腕には腫瘍抑制遺伝子のひとつであるp53が乗っている^17）．野生型p53は腫瘍増殖に対し抑制効果を持つが，変異をおこすとその作用を失い，腫瘍の増殖が増すことが知られている．このようなp53遺伝子の異常，特に点突然変異は各種悪性腫瘍において認められており^23），脳腫瘍もその例外ではなく，悪性星細胞腫においてはその30から40％においてp53の点突然変異が見つかっている^8,10,18）．この変異型p53の腫瘍発育における意義の全貌は明らかではないが，グリオーマに関しては，良性から悪性に変化していく過程，すなわちnalignant transformationにおいて重要な役割を担ってのるのではないかと考えられている^26）．

　野生型p53蛋白の半減期は約20分と極めて短い^11,24）が，viral proteinとの結合やp53遺伝子自体の点突然変異，部分欠失などによりp53蛋白は安定化されることが知られている^12,22）．このため，一般に抗p53抗体を用いた免疫染色では純粋な野生型p53蛋白は陰性となるが，変異型p53蛋白または他の蛋自と結合し安定化された野生型p53蛋白，すなわち，過剰発現しているp53蛋白は同定することができる．レベルにおける変異との相関関係はすでに報告^{2，4，6，7，19，25）}されているが，免疫染色ではしばしばその特異性ならびこ染色性が問題となり，陽性陰性の判断の困難な場合が少なくない．

We analyzed the levels of p53 protein in 10 frozen astrocytoma specimens by using an ELISA kit. p53 protein was detected in seven of ten specimens, and ranged from 0.4 to 18.0ng/ml. To confirm that the p53 protein detected in this study actually represented mutations occurring within the p53 gene, we deter-mined the nucleotide sequence in five of six positive cases, and in three of four negative cases. We amplified exons 5 to 9 by the PCR and sequence analysis was carried out by the dideoxy chain termination method.Point mutations resulting in amino acid substitutions were found in four of five positive cases but not in negative cases. Then we analyzed the presence of p53 protein in sera of 42 patients with malignant astrocyto-ma and 34 healthy donors, by the same method. p53 protein was detected in sera of 7 of 42 patients and 6 of 34 healthy donors, suggesting that this result may he clue to non-specific responses. In conclusion, using the ELISA kit, overexpression of p53 protein, resulting from p53 mutations, in frozen astrocytoma specimens can be detected. This may be a good screening method for the detection of overexpression of p53 protein.