Pseudomonas aeruginosaのpiperacillinに対する耐性化におけるtazobactamの抑制効果

The inhibitory effect of tazobactam on development of piperacillin resistance in Pseudomonas aeruginosa

　Pseudomonas aeruginosa（緑膿菌）のpiperacillin（PIPC）に対する耐性化におけるtazobactam（TAZ）の抑制効果を検討した。実験室株の緑膿菌PAO1株にTAZ/PIPCもしくはPIPCを作用させ，培養液中の耐性菌選択頻度を調べたところ，PIPCでは4 MIC（最小発育阻止濃度）以上の薬剤作用後において耐性菌選択頻度は検出限界以下であったが，TAZ/PIPCではより低濃度の2 MIC作用後においても耐性菌選択頻度は検出限界以下であり，TAZ配合による緑膿菌のPIPCに対する耐性化抑制効果が認められた。臨床分離株を用いてその効果をより詳細に測定すべく，E-testを用いて２日培養後のコロニーの出現程度を比較するため阻止帯面積を比較したところ，臨床分離株65株中64株（98.5％）においてTAZ/PIPCの阻止帯面積はPIPCよりも大きく，TAZ配合によるPIPC耐性化の抑制傾向が認められた。この薬剤間の差異はAmpC阻害活性を有する3-aminophenyl boronic acid（APB）添加培地での測定で小さくなったことから，TAZ/PIPCおよびPIPC作用による緑膿菌の耐性化機構はAmpC産生であると考えられた。TAZのampC転写過程の阻害効果を検討すべく，緑膿菌PAO1株を用いてTAZ/PIPCもしくはPIPCをそれぞれ作用させた際のampC転写量を調べたが，薬剤間での差は認められなかったことから，TAZによる耐性化抑制機構はampC転写阻害作用と異なることが示唆された。

　We investigated the inhibitory effect of tazobactam on development of piperacillin resistance in Pseudomonas aeruginosa. The mutation frequencies of P. aeruginosa cultured in liquid medium were determined after tazobactam/piperacilin or piperacillin exposure. Piperacillin decreased the mutation frequencies to detection limit at 4 MIC, while tazobactam/piperacilin at 2 MIC which is lower concentration than piperacillin. In order to evaluate the effect of tazobactam against clinical isolates in detail, we cultured P. aeruginosa with Etest strips containing tazobactam/piperacillin or piperacillin for two days, then, instead of counting the number of colonies, we measured the inhibition zone of Etests. Since the inhibition zone of tazobactam/piperacillin was larger than that of piperacillin in 64 of 65 clinical isolates, tazobactam was appeared to have the effect to suppress piperacillin resistance. The difference of inhibition zone between these antimicrobials became smaller when they were measured on an agar containing 3-aminophenyl boronic acid. This result suggested that the resistant mechanism of P. aeruginosa exposed to tazobactam/piperacillin or piperacillin was over expression of AmpC. Though we examined ampC trancsriptioal level of P. aeruginosa treated with tazobactam/piperacillin or piperacillin, there was no difference in the transcriptional level between these antimicrobials. It was suggested that the suppression effect of tazobactam on development of resistance is not from the inhibition activity of ampC transcription.