マイクロプレート光度計を用いた血清IgEの酵素免疫測定法

An Enzyme Immunoassay for the Measurement of Immunoglobulin Ein Human Serum Using a Microplate Spectrophotometer

はじめに

　ヒト血清中のIgEの測定についてはいくつかの酵素免疫測定法（EIA）が開発されている^1〜5）．Hoffman^1）は抗IgE抗体結合プラスチック製チューブとアルカリホスファターゼ（ALP）標識IgEを用いた競合法を報告した．Guesdonら^2）はグルコースオキシダーゼ標識抗IgG抗体を用いたSRID法を，またWeltmanら^3）はβ-D-ガラクトシダーゼ（β-Gal）標識家兎抗ヒツジIgG抗体を用いた二抗体法を，Guesdonら^4,5）はβ-Galなどの酵素で標識した抗IgE抗体を用いた固相法を報告した．Hoffmanらの方法^1）における測定感度は，10μlの血清試料を用いて50IU／mlという値であった．また20μlの血清試料を用いるGuesdonらのSRID法^2）においては20IU／ml,500μlの血清試料を用いるGuesdonらの固相法^4,5）においては5IU／mlあるいは2IU／mlという測定感度が報告されている．これらの方法においては酵素とIgE，あるいは抗IgE抗体との結合にグルタルアルデヒドが架橋剤として用いられてきた．グルタルアルデヒドによる架橋は測定に不都合な過度の重合を起こす危険性がある．われわれは抗体の力価には影響を与えないジマレイミドを架橋剤とし，また標識酵素としてβ-Galを用い酵素抗体複合体を作製した．