DHPLOによるDNAフラグメント解析

はじめに

　Denaturing high performance liquid chromatogra-phy （DHPLC）は，1本鎖および2本鎖DNAの分離¹）はもとよりHomoduplexとHeteroduplex DNAの分離にも有効な方法である^2）．最近ではDHPLCの自動化機器も市販されてきた．

　PCRで増幅した正常DNA断片と検体のDNA断片を混合後熱変性し，両者の間にミスマッチを持ったハイブリッド（Heteroduplex）が形成されるか否かを調べることにより変異を高感度に検出する方法がHeteroduplex解析（Heteroduplex Analysis；HA）である．しかし，Heteroduplex DNAの検出には，denaturing gradient gel electophoresis （DGGE）やtemperature gradient gel electrophoresis （TGGE）など煩雑な電気泳動技術が必要である^3）．この際，Heteroduplexを形成したDNA断片が，変性条件の電気泳動で検出されやすいように40塩基程度のGCクランプを持つプライマーにて増幅する必要があり^4），Heteroduplex解析普及の妨げになってきた．