法医学試料の問題点と抽出・精製法

法医学試料の性状 　法医学試料とは，事件・事故現場で発見される血痕，精液斑などの斑痕試料や，犯罪死体，変死体から得られる試料をさし，個人識別などの目的でこれらからDNAを抽出し，分析する．斑痕試料は屋内，屋外などの不衛生な汚染された環境で，場合によっては長期間放置されているし，死体も発見までに時間がかかれば腐敗が進行する．その結果，試料採取時にすでに試料内のDNAの分解が進行していたり，体外，体内の物質に汚染されていたりして，DNA検査に悪影響を及ぼすことがしばしばある．

　DNAは基本的にフェノール・クロロフォルム法で抽出する．試料が新鮮血の場合は白血球沈渣を，組織片の場合は事前に裁断し，血痕などの斑痕試料は切断片をそのまま用いる．これらの試料を蛋白分解酵素と界面活性剤の入ったバッファーで蛋白質，脂質を消化する．次にフェノール・クロロフォルム溶液を等量添加して，混和・遠心分離して分解した蛋白質，脂質をフェノール層に移す．水層のみをとってこの操作を繰り返し，最後に水層を2倍量の70%エタノールと混和すればDNAが析出し，遠心分離して回収することができる．通常はこの方法でDNA以外の不純物は除去されるが，法医学試料ではDNAとともに抽出される不純物が少なくないし，分解しているDNAは除去されず，これらがPCR増幅を阻害する．このような阻害因子の種類とその精製法について説明する．