ダイレクトシーケンスによるHCV遺伝子型同定法

　C型肝炎ウイルス(hepatitis C virus，HCV)は約9.5kbのプラス鎖RNAをゲノムとするウイルスであり，HCV感染の半数以上は持続感染し，慢性肝炎，肝硬変，肝細胞癌の70％以上が起因している^1）．C型肝炎の治療法はインターフェロン(INF)療法が一般的であるが，最近は，INFとリバビリンとの併用療法が施行されつつあり，その効果にはHCV量および遺伝子型が関与し，特に遺伝子型は肝障害の重症度と関連性がある^2）．なお，表のごとく従来からHCV遺伝子型の分類が各研究者から報告されているが，現在ではSimmondsらの分類が統一呼称として用いられている^3）．その判別法としては種々の方法があるが，本稿では各種HCV遺伝子型同定法の特性およびダイレクトシーケンスによるHCV遺伝子型同定法(以下，ダイレクトシーケンス法)の概要とその有用性について概説する．

　各種HCV遺伝子型同定法の特性

　HCV遺伝子型同定法は，わが国では岡本らにより確立した方法が標準的方法であり，スマイテストHCVジェノタイプ(特殊免疫研究所)として市販されている^4）．本キットはHCV陽性血清から抽出したHCV-RNAを使用し，各遺伝子型(Ⅰ～Ⅳ)共通のCORE領域の1部(272bp)を逆転写反応させ，その増幅DNAを鋳型として，各ジェノタイプ特異的プライマーを使用し，nested-PCR(polymerase chain reaction，ポリメラーゼ連鎖反応)法によりDNA増幅を行い，得られた電気泳動パターンによりHCV遺伝子型を判定するものである．利点としてはnested-PCR法を用いることで検出感度に優れている点であるが，反面，特異性に難がある．